TECOmedical 總人脂聯素 ELISA說明書

TECOmedica TE1013使用說明書英文

TECO® 腎上腺髓質素 ELISA 試劑盒

TECO® 總人脂聯素 ELISA 試劑盒

提供的試劑和材料：

符號 描述 格式

1 抗體包被微孔 1 板

一幀中 8 個孔的 12 個分離條（總計 12 x 8），即用型

A 標準品 A 1 x 0.75 mL

2 ng/mL-凍干

B 標準品 B 1 x 0.75 mL

10 ng/mL-凍干

C 標準品 C 1 x 0.75 mL

30 ng/mL-凍干

D 標準品 D 1 x 0.75 mL

70 ng/mL-凍干品

E 標準品 E 1 x 0.75 mL

100 ng/mL-凍干

L 對照 1 1 x 0.5 mL

ng/ml– 凍干品，范圍如數據表所示

H 對照 2 1 x 0.5 mL

ng/ml– 凍干品，范圍如數據表所示

2 稀釋緩沖液 1 x 25 mL

即用型

3 抗體 HRP 結合物 1 x 12 mL

即用型

4 TMB 底物 1 x 12 mL

即用型

5 清洗緩沖液 1 x 50 mL

20 倍濃縮

7 微量滴定板粘合劑蓋 貳件

套件說明 1 x3 TECOmedical

儲存

將試劑盒儲存在 2-8 ℃ 下。請勿冷凍。將未使用的試劑儲存在 2-8 ℃ 下。

使用說明書

TECO® 總人脂聯素試劑盒是一種靈敏的“雙位點”夾心酶聯免疫吸附體外試驗，用于定量測定人血漿和血清中的脂聯素。

臨床應用

• 肥胖
• 動脈硬化
• 能量代謝
• 冠心病
• 多囊卵巢綜合征

脂聯素是一種分子量為 30 kDa 的蛋白質，占血清蛋白的 0.01%。主要由脂肪細胞合成，但肌肉細胞和肝細胞也具有合成脂聯素的能力。直到現在，IGF-I 是已知的合成天然誘導劑。它由膠原蛋白樣 N 末端和球狀 C 末端結構域組成 [1]。體內脂聯素以不同的低聚物出現。除三聚體和三聚體外，還存在高分子多聚體 [1～3]。到目前為止，已知有兩種不同的受體，兩種受體普遍表達，盡管在組織中的分布各不相同。脂聯素受體 1 (AdipoR1) 尤其在肝組織的肌肉和 AdipoR2 中合成 [4]。

對人類有機體的意義直到現在還不*清楚。初的研究表明，脂聯素與 BMI 呈負相關，因此它可能與能量代謝相關，例如通過調節脂肪酸氧化。除了與 BMI 相關外，脂聯素水平還與胰島素抵抗相關 [5-7]，因此也與 II 型糖尿病相關。脂聯素也與葡萄糖和脂肪代謝相關 [8,9]。

如重復描述，在三種檢測系統的比較研究中無法證明高分子多聚體的特殊診斷意義 [10]。

此外，脂聯素參與炎癥過程 [11-15]，并對  動脈硬化 [4，5，16] 和冠狀動脈炎 [17，18] 的出現。因此，測定血漿中的脂聯素水平可用于估計冠狀動脈疾病的風險 [19,20]。除此之外，脂聯素還影響進一步的生理過程，例如血管生成 [21,22]。

4

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5 TECOmedical

試驗原理

Adiponectinisaso 的 teco® 檢測試劑盒稱為 Sandwich-Assayusingtwospecificandhighaffinitymonoclonal antibodies。樣本中的脂聯素與包被在微量滴定板上的抗體結合。在下一步中，第二種特異性抗脂聯素抗體依次與固定的脂聯素結合。第二種抗體生物素化，并與鏈霉親和素-過氧化物酶-酶結合物在混合物中孵育。在關閉底物反應中，根據樣品的脂聯素水平，將定量催化顏色的變化。

需要但未提供的材料

• 能夠分配 5 μL、40 μL、80 μL、100 μL、320 μL、350 μL、500 μL、560 μL 和 750 μL 的移液器

• 用于復溶或稀釋試劑的量筒

• 手動抽吸系統和多通道移液器或自動清洗器

• 蒸餾水

• 渦旋混合器

• ELISA 酶標儀適用于 96 孔板，能夠在 450 和 405 nm 處測定（參比波長：590–650 nm）。

• ELISA 板振蕩器 (350 rpm)（定軌振蕩器）

• 用于數據生成和分析的軟件包

警告和注意事項

本試劑盒僅供專業人員在體外使用。

認真遵循說明。

觀察標簽上注明的失效日期和復溶試劑的規定穩定性。更詳細的安全信息請參見“材料安全數據表”。本試劑盒制備中使用的人源材料已經過檢測，發現對 HIV-1 和 HIV-2 以及 HCV 抗體和 HbsAg 無反應性，但應視為具有潛在傳染性進行處理。TECOmedical AG 對于因未遵守試劑盒說明造成的損失或傷害不承擔任何責任。

1. 用于體外診斷。

2. 將所有樣本視為具有潛在生物危害性的材料。處理本試劑盒內容物和任何患者樣本時，請遵循一般注意事項。

3. 應按照聯邦和當地法規要求處置容器和未使用的內容物。

4. 在包裝標簽上注明的失效日期之前，使用提供的試劑作為一個整體。請勿使用明顯損壞或被微生物污染或溢出的材料。

5. 按照指示儲存測定試劑。

6. 如果包裝袋被刺破，請勿使用涂層條。

7. 每份樣品重復檢測兩次。

8. 建議使用多通道移液器或重復移液器，以確保液體的及時輸送。

9. a) 0,2m 硫酸具有腐蝕性，可引起嚴重燒傷。

b) 小心處理 TMB。

Do  不  攝入。  避免  接觸  與  皮膚，  眼睛，  or  衣物。  If  接觸  is  制成，  清洗  與  水。        如果攝入，請就醫。

10. 使用 5-氯-2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮和 2-甲基-4-異噻唑啉-3-酮的混合物作為防腐劑 (< 0.015%)。

請勿攝入。避免接觸皮膚、眼睛或衣物。如果發生接觸，用水清洗。如果攝入，請就醫。

6

試劑制備

1 包被抗人脂聯素抗體的微量滴定板

將 12 個分離條（共 8 個孔，共 96 個）分隔成一幀，并密封在鋁箔袋中。將條帶孔牢固地裝入框架中。打開后，立即返回  任何  未使用  孔  to  的  原始  箔  包裝  和  密封。  在 2–8 ℃ 下儲存至失效日期。初次開啟后，組件的有效期為 4 周。

A 標準至5 瓶含天然脂聯素（2、10、30、70 和 100 ng/mL）的凍干標準品。復溶

各 E  標準  與  750  μl  of  稀釋度  緩沖液。  保存  復溶  試劑  at  房間  溫度  15 min，然后用渦旋器輕輕混合（無泡沫！）。復溶后，標準品可在-20 ℃ 下穩定儲存 1 個月。僅一個凍融循環或等分保存。凍干品在 2-8 ℃ 下儲存。

L 質控品 1

1 瓶凍干對照品（人血清）。用 500 μL 稀釋緩沖液復溶。將復溶試劑在室溫下放置 15 min，然后用渦旋器輕輕混合（無泡沫！）。復溶后，質控血清在-20 °C 條件下可穩定儲存 1 個月。僅 1 個凍融循環或等分保存。有關精確值，請參閱數據表。凍干品在 2-8 ℃ 下儲存。

H 對照 2

1 瓶凍干對照品（人血清）。用 500 μL 稀釋緩沖液復溶。將復溶試劑在室溫下放置 15 min，然后用渦旋器輕輕混合（無泡沫！）。復溶后，質控血清在-20 °C 條件下可穩定儲存 1 個月。僅 1 個凍融循環或等分保存。有關精確值，請參閱數據表。凍干品在 2-8 ℃ 下儲存。

2 稀釋緩沖液

125 mL 1 支，即用型。緩沖液中可能存在沉淀，使用前通過混合和/或加熱解決。在 2–8 ℃ 下儲存至失效日期。初次開封后，組件的失效日期  保證 4 周。

3 抗體-HRP 結合物

1 瓶 12 mL，即用型。辣根過氧化物酶標記的抗人脂聯素。在 2–8 ℃ 下儲存至失效日期。初次開啟后，組件的失效日期為       4 周。

4 TMB 底物

1 瓶 12 mL。備用。在 2–8 ℃ 下儲存至失效日期。初次開啟后，組件的有效期為 4 周。

5 清洗緩沖液

1 瓶 50 mL 緩沖液。緩沖液中可能存在沉淀，使用前通過混合和/或加溫使小瓶內容物用蒸餾水補足至 1000 mL 解決。稀釋后的洗滌液在 2–8 °C 下可穩定儲存 4 周。未稀釋的洗滌液在 2–8 °C 下儲存直至失效日期。初次開啟后，組件的有效期為 4 周。

6 終止液 –0.2 MH2SO4

• 12 mL 0.2 MH2SO4 小瓶。備用。在 2–8 ℃ 下儲存至失效日期。初次開啟后，組件的有效期為 4 周。

7 微量滴定板蓋

• 碎片、粘合劑。

7 TECOmedical

血清樣本的制備和穩定性

樣本類型

建議空腹采集血樣。人血清或血漿、乳汁、尿液、CSF 和  細胞  培養。在血清和肝素血漿中發現了相似的值，但在 EDTA 和檸檬酸鹽血漿中，樣本值為  降低 18%。

脂聯素：

血清與 EDTA 血漿 –5 種不同檢測中的 20 份樣本

穩定性

• 室溫下多 2 天
• Maximum 2 years at -20 °C 下長 2 年
• 多 3 個凍融循環

注

樣品必須用稀釋緩沖液稀釋。樣品稀釋后的樣品穩定性：多 1 小時    20-25 ℃ 下

大多數情況下（對于血清或血漿樣本，如果預期無極值），用稀釋緩沖液以 1:200 至 1:1600 的稀釋度應該是合適的。根據預期的脂聯素水平，稀釋度可能較高或較低。除血清或細胞培養上清液外，人源體液中的脂聯素濃度可能*不同。

一般而言，血清或血漿樣本的 1:300 稀釋因子適用于臨床診斷。樣品稀釋后的樣品穩定性：20-25 ℃ 下多 1 小時。

稀釋方案建議：

• 一步稀釋 (1:300)：

將 5 μL 樣品稀釋于 1.5 mL 稀釋緩沖液中

• 兩步稀釋 1:300：

1. 向 560 μL 稀釋緩沖液中加入 40 μL 血清或血漿，按 1:15 稀釋（建議在較大系列中應用多步進器）。

2. 然后將 20 μL 充分混合的一份稀釋液加入 380 μL 稀釋緩沖液中?；旌虾螅褂?2 × 100 μL

來自試驗中的該稀釋樣品。

8

測定程序

所有測定（標準品、稀釋的血清質控品和稀釋的樣本）應重復測定兩次。進行測定時，應盡快 (< 15 min) 移取標準品、質控血清和樣本。為避免由于孵育時間的差異導致的失真，應以與樣品相同的順序和相同的時間間隔向微孔板中加入 HRP 結合物、底物溶液和終止液。允許使用所有試劑   在室溫 (20-25 ℃) 下靜置至少 30 min。復溶后，將試劑在室溫下放置 15 min，使用前輕輕混勻。

1. 準備框架和所需數量的涂層條 1。

2. 為標準品、對照品和樣品分配微量滴定板的孔。

稀釋樣品，見第 8 頁和對照品 (1:300)。

3. 移取 100 μL 稀釋緩沖液 2，一式兩份，置于微孔中（空白）。

4. 移取 100 μL 各標準品 (A-E)、稀釋的對照血清（l 和 H）和樣品（見稀釋方案）至相應孔中。

5. 用密封膠帶覆蓋微孔，并在微孔板振蕩器 (350 rpm) 上于室溫 (20–25 ℃) 下孵育微孔板 1 小時

• 孵育后，使用洗板機吸取微孔，或通過倒置微孔板手動傾倒微孔。  用 350 μL 稀釋的清洗緩沖液清洗微孔 3 次（每個循環孵育 15 秒）。后一次清洗循環后，在干燥的吸收劑表面上輕輕敲擊倒置的微孔，以除去多余的清洗液。

7. 在每個孔中移取 100 μL 抗體 HRP 結合物 3。

8. 用密封膠帶覆蓋微孔，并在微孔板振蕩器 (350 rpm) 上于室溫 (20–25 ℃) 下孵育微孔板 30 min。

9. 按照步驟 6 所述，用清洗緩沖液清洗微孔 3 次。

10. 在每個孔中移取 100 μL TMB 底物溶液 4。

11. 在室溫 (20-25 ℃) 下避光孵育平板 15 min。

12. 每孔加入 100µl 終止液 6。

13. 在 30 min 內測量 450 nm 處的顯色反應（參考濾光片在 590–650 nm 之間）。具有強顯色反應，例如 > 3 OD，也可在 405 nm 處測量。

不同自動 ELISA 系統的方案可用。

結果分析

為評價含量測定，空白的吸光度值應低于 0.25，標準品 E 的吸光度值應超過 1.0，對于吸光度值高于標準品 E 的樣品，應使用更高的稀釋度再次進行檢測。以標準品濃度為 x 軸（線性標度），以標準品吸光度為 y 軸（線性標度），繪制標準曲線。然后可以從標準曲線上讀取稀釋患者血清中的脂聯素濃度。應使用 4 參數曲線擬合進行自動數據簡化。通過將標準曲線上讀取的值乘以稀釋因子獲得樣本和對照品的脂聯素濃度。

質量控制

良好實驗室  練習  要求  那  控制  是  包括  in  每個  含量測定。  A  統計學  顯著  編號  的質控品應進行測定，以建立  平均值  數值  和  可接受  范圍  to  保證  適當的表現。只有按照說明進行試驗，試驗結果才有效。此外，用戶必須嚴格遵守 GLP（藥物非臨床研究質量管理規范）規則或其他適用聯邦、州或當地標準/法律。所有標準品和試劑盒質控品必須在 QC 證書規定的可接受范圍內。          如果不符合標準，則運行無效，應重復運行。各實驗室應使用已知樣本   作為進一步控制。

9 TECOmedical

450 nm 處的典型結果

（僅為示例。不用于計算實際結果）

*通過稀釋因子 1:300 校正

對于每次測定，質控品的結果必須在每個批次指示的目標范圍內。試劑盒提供了包含目標范圍的 QC 方案。如果質控值不在目標范圍限值內，則應將測定結果視為可疑，并應再次檢測樣本。

結果解釋

檢測結果不應成為治療決策的依據。應根據既往病歷、進一步臨床觀察結果和其他診斷研究的結果解釋結果。此外，建議為每個實驗室建立與相關患者組相對應的參考值和臨界值。

程序限制

TECO 敏感的人脂聯素 ELISA (TE1013) 基于單克隆抗體。通常，該技術對樣本中的異嗜性抗體或風濕因子敏感。通過試驗設計降低了其影響，但不能*排除。

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參考值

使用 TECO®ELISA 試劑盒在健康供體中測定的血清脂聯素預期值如下所示。這些數據顯示脂聯素-血清值與健康受試者的年齡和性別顯著相關。反過來，各自 BMI 之間的相關性似乎不太顯著。在新生兒臍帶血樣本中發現脂聯素值*。

成人預期值，性別特異性

預期值，特定年齡

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 與 BMI 相關的特定年齡和性別的預期值

BMI = 體重指數 (kg/m2)

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測試性能

校準

試劑盒中的標準品由天然脂聯素（人血清）制備，并根據重組蛋白進行定量。

精密度（批間）

（測定內）

檢測限

+ 2 標準偏差時的檢測下限 (LLOD) 為 < 0.27 ng/mL。

回收試驗

血清基質中重組脂聯素的回收率平均為 110%。

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稀釋試驗

干擾

向血清樣本中加標不同濃度的可能干擾物質，測量脂聯素的量，并與未加標的相同樣本中的脂聯素濃度進行比較。所有供試品均未對脂聯素測定產生顯著干擾。

交叉反應性

與以下種屬無交叉反應：馬、牛、雞、兔、犬、豚鼠、綿羊、小鼠、山羊、驢、大鼠、貓、豬。

備注

本說明書引用的數據僅供參考。建議每個實驗室在測定中包括自己的一組對照樣本。為了遵循 GLP 指南，各實驗室應建立自己的脂聯素水平正常和病理范圍。

TECO® 總人脂聯素

 測定程序-快速指南

使用快速指南前，請閱讀試劑盒說明

標準曲線 艾克庫爾 Courbe 標準

日期 04.06.2020