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Enzymatics L6090L 說明書

更新時間：2018-04-11 點擊次數(shù)：2009

貨號：L6090L

品名：E. coli DNA Ligase（大腸桿菌DNA連接酶）

產(chǎn)品描述：

大腸桿菌 DNA連接酶催化DNA末端的相鄰5'磷酸和3'羥基之間形成磷酸二酯鍵，需要NAD +和Mg 2+作為輔因子。相對于粘性DNA末端連接和缺口密封，平末端DNA的連接是非常低效的。

規(guī)格：	2,500 U
濃度：	10,000 U/ml
保存：	-25°C至-15°C
純度（SDS-PAGE）	> 99％
活性：	20,000 - 28,880 U/mg
SS核酸外切酶	100 U < 2.0% released
DS核酸外切酶	100 U < 1.0% released
DS內(nèi)切核酸酶	100 U = no conversion
大腸桿菌 DNA污染	50 U <10 copies

蛋白質來源

大腸桿菌表達質粒編碼大腸桿菌DNA連接酶的基因。

提供：

10 mM Tris-HCl
50 mM KCl
1 mM DTT
0.1 mM EDTA
50% glycerol
pH 7.5 @ 25℃

隨附：

B6090 (10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer)

10X E.coli DNA Ligase Reaction Buffer (B6090):
300 mM Tris-HCl
40 mM MgCl2
260 uM NAD
10 mM DTT
0.5 mg/mL BSA

單位定義
1單位定義為在25℃下30分鐘內(nèi)連接100ng DNA的片段的50％與粘性末端所需的大腸桿菌 DNA連接酶的量。

質量控制分析

單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X反應緩沖液中制備酶的稀釋液并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X反應緩沖液的反應中。將反應在25℃（室溫）孵育30分鐘，在冰上浸入，并在用溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上分析。

蛋白質濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標準化的Nanodrop ND-2000分光光度計
在OD 280處分析2.0μL酶樣品，并用產(chǎn)品儲存溶液沖切。使用34,280的消光系數(shù)和73,606道爾頓的分子量將觀察到的3個重復樣品的平均測量結果轉換為mg / mL。

SDS-Page（物理純度評估）

將2.0μL酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側翼為寬范圍的MW標記和2.0μL的1:100稀釋的樣品。電泳后，將凝膠染色并比較樣品以確定物理純度。該測試的驗收標準要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質條帶的質量，確認濃縮樣品的純度大于99％。

污染測試

單鏈核酸外切酶活性

將含有10,000cpm放射性標記的單鏈DNA底物和10μl酶溶液的50μL反應物在37℃下溫育4小時，導致TCA可溶性計數(shù)的釋放小于2.0％。

雙鏈核酸外切酶活性將含有5,000cpm放射性標記的雙鏈DNA底物10μl的50μL反應液和在37℃下孵育4小時的酶溶液導致少于1.0％的TCA可溶性計數(shù)釋放。

雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和100單位酶溶液的50μL反應液在37℃下溫育4小時，結果通過瓊脂糖凝膠電泳測定，沒有視覺上可辨別的轉化為帶切口的環(huán)狀DNA。

大腸桿菌 16S rDNA污染測試
將酶溶液的重復樣品變性，并使用對應于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物，在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA的存在。測試的驗收標準是由3個重復的無模板對照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計數(shù)（C t）。基于無模板對照 Ct值與標準曲線數(shù)據(jù)之間的相關性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。

部分產(chǎn)品信息：

貨號	品名	規(guī)格	濃度	品牌
N2070-10-L	ATP Solution	50 µmol	10 mM	Enzymatics
N2050-10-L	10 mM dNTP Solution Mix	100 µmol	10 mM	Enzymatics
N2010L	100 mM 75µmol dNTP Solution Set	75 µmol	100 mM	Enzymatics
N2010-A-L	100 mM dATP Solution	75 µmol	100 mM	Enzymatics
N2050L	100µmol dNTP Solution Mix	100 µmol	25 mM	Enzymatics
Y9180L	10x Uracil Cleavage System	750 Reactions	N/A	Enzymatics
P7670	2x HiFi PCR Master Mix	1 rxn	2x	Enzymatics
Y9420L	5x ER/A-Tailing Enzyme Mix	24 reactions	N/A	Enzymatics
Y9380L	E. coli Pyrophosphatase	50 U	100 U/mL	Enzymatics
Y9030L	E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein	1.5 mg	2.75 mg/ml	Enzymatics
Y9140-HC-L	End-Repair Mix (High Concentration)	75 Reactions	1 Rxn/µL	Enzymatics
Y9140-LC-L	End-Repair Mix (Low Concentration)	200 Reactions	1 Rxn/µL	Enzymatics
Y9080L	Endonuclease VIII	10,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics
P7600L	EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-)	10,000 U	200,000 U/mL	Enzymatics
X8010L	Exonuclease I	30,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
X8020L	Exonuclease III	50,000 U	100,000 U/ml	Enzymatics
P7010-HC-L	Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration)	10,000 U	50,000 U/ml	Enzymatics
P7010-LC-L	Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration)	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7060L	Klenow Fragment	2,500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
X8030L	Lambda Exonuclease	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7040L	M-MuLV Reverse Transcriptase	100,000 U	200,000 U/ml	Enzymatics
P7090L	Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-)	3,000 U	30,000 U/ml	Enzymatics
P7140-HC-L	Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration)	100,000 U	400,000 U/ml	Enzymatics
P7140-LC-L	Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration)	100,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
P7610L	NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions	250 Reactions	2X	Enzymatics
P7590L	Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase	500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7460L	Poly(A) Polymerase	1,000 U	5,000 U/mL	Enzymatics
Y9260L	RecA	1.5 mg	2.0 mg/mL	Enzymatics
Y9220L	RNAse H	5,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
Y9240L	RNAse Inhibitor	20,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
L6010L	T3 DNA Ligase	900,000 U	3,000,000 U/ml	Enzymatics
L6030-LC-L	T4 DNA Ligase	150,000 U	120,000 U/ml	Enzymatics
L6030-HC-L	T4 DNA Ligase (Rapid)	240,000 U	600,000 U/ml	Enzymatics
P7080L	T4 DNA Polymerase	2,000 U	3,000 U/ml	Enzymatics
Y9130L	T4 Gene 32 Protein	1.0 mg	10 mg/mL	Enzymatics
Y9040L	T4 Polynucleotide Kinase	10,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics
L6050L	T4 RNA Ligase 1	10,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
L6080L	T4 RNA Ligase 2	4,500 U	30,000 U/ml	Enzymatics
L6070L	T4 RNA Ligase 2 Truncated	500 U	5,000 U/ml	Enzymatics
L6020L	T7 DNA Ligase	900,000 U	3,000,000 U/ml	Enzymatics
P7260L	T7 DNA Polymerase	3,500 U	10,000 U/ml	Enzymatics
P7180L	T7 RNA Polymerase	50,000 U	50,000 U/ml	Enzymatics
L6060L	Taq DNA Ligase	20,000 U	40,000 U/ml	Enzymatics
P7110L	Taq DSC 2.0 DNA Polymerase	1,250 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7250L	Taq-B DNA Polymerase	10,000 U	5,000 U/ml	Enzymatics
P7620L	TaqIT	5,000 U	50,000 U/mL	Enzymatics
P7070L	Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT)	6,000 U	20,000 U/ml	Enzymatics
G5020L	Thermolabile UDG	500 U	1,000 U/ml	Enzymatics
Y9370L	Thermostable Pyrophosphatase	1,250 U	2,000 U/ml	Enzymatics
G5010L	Uracil DNA Glycosylase	10,000 U	2,000 U/ml	Enzymatics
P7511L	VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase	500 U	2,000 U/ml	Enzymatics
P7520L	VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase	500 U	2,000 U/ml	Enzymatics
L6030-W-L	WGS Ligase	24 Reactions	N/A	Enzymatics
P7640L	ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit	1000 Reactions	N/A	Enzymatics
P7020-HC-L	φ29 DNA Polymerase (High Concentration)	2,000 U	100,000 U/ml	Enzymatics
P7020-LC-L	φ29 DNA Polymerase (Low Concentration)	2,000 U	10,000 U/ml	Enzymatics

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