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貨號：L6020L
產(chǎn)品描述：
T7 DNA連接酶催化雙鏈DNA中5'磷酸和3'羥基末端之間形成磷酸二酯鍵。該酶將加入平端和粘性末端以及修復(fù)雙鏈DNA中的單鏈缺口。
規(guī)格： | 900,000 U |
濃度： | 3,000,000 U/ml |
保存： | -25°C至-15°C |
純度（SDS-PAGE） | > 99％ |
活性： | 3,000,000 U/mg |
SS核酸外切酶 | 30,000 U <1.0% released |
DS核酸外切酶 | 30,000 U <1.0% released |
DS內(nèi)切核酸酶 | 30,000 U = No conversion |
大腸桿菌 DNA污染 | 30,000 U <10 copies |
其他 | 1.在沒有高濃度擁擠劑（例如20-30％PEG 6-8000）的情況下，T7 DNA連接酶的特異性活性在平末端片段上減少1000倍（1,2）。 2.T7 DNA連接酶不能連接單鏈DNA的片段（1）。 |
蛋白質(zhì)來源
攜帶T7 DNA連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
提供：
20mM Tris-HCl
50mM NaCl
1mM DTT
0.1mM EDTA
50％甘油
pH 7.5在25℃
隨附：
B1010 (2X Rapid Ligation Buffer)
2X Rapid Ligation Buffer (B1010):
132mM Tris-HCI
20 mM MgCl2
2 mM DTT
2 mM ATP
15% PEG 6000
pH 7.6 @ 25°C
單位定義
1單位定義為在23℃30分鐘內(nèi)連接50ng 100ng DNA的片段與粘性末端所需的T7 DNA連接酶的量。
質(zhì)量控制分析
單位表征測定
單位活性使用2倍系列稀釋法測量。在1X快速連接緩沖液中進行酶稀釋，并加入到20μL含有雙鏈DNA的片段和1X快速連接緩沖液的反應(yīng)中。將反應(yīng)在?23℃（室溫）孵育30分鐘，在冰上沉降，并在用溴化乙錠染色的1％瓊脂糖凝膠上分析。
蛋白質(zhì)濃度（OD 280）測量使用使用2.0mg / ml BSA樣品（Pierce Cat＃23209）標準化的Nanodrop ND-1000分光光度計
在OD 280處分析2.0μL酶樣品并用產(chǎn)品儲存溶液沖切。觀察到的3個重復(fù)樣品的平均測量值使用67,850的消光系數(shù)和41,132道爾頓的分子量轉(zhuǎn)換為mg / mL。
SDS-Page（物理純度評估）
將2.0μL濃縮的酶溶液加載到變性的4-20％Tris-甘氨酸SDS-PAGE凝膠上，該凝膠側(cè)翼為寬范圍的MW標記和2.0μL的樣品的1:100稀釋物。電泳后，將凝膠染色并比較??樣品以確定物理純度。該測試的驗收標準要求濃縮樣品中污染帶的總量不超過稀釋樣品中目的蛋白質(zhì)條帶的質(zhì)量，確認濃縮樣品的純度大于99％。
污染測試
單鏈核酸外切酶活性
將含有10,000cpm放射性標記的單鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時，導(dǎo)致TCA可溶性計數(shù)的釋放小于1.0％。
雙鏈外切核酸酶活性將含有5,000cpm放射性標記的雙鏈DNA底物和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時，導(dǎo)致TCA可溶性計數(shù)的釋放小于1.0％。
雙鏈核酸內(nèi)切酶活性將含有0.5μgpBR322 DNA和10μL酶溶液的50μL反應(yīng)物在37℃下溫育4小時，結(jié)果通過瓊脂糖凝膠電泳確定沒有肉眼可察覺地轉(zhuǎn)化為帶切口的環(huán)狀DNA。
大腸桿菌 16S rDNA污染測試
復(fù)制酶溶液的5uL樣品變性，并在TaqMan qPCR測定中篩選污染性大腸桿菌基因組DNA，使用對應(yīng)于16S rRNA基因座的寡核苷酸引物。測試的驗收標準是由3個重復(fù)的無模板對照樣品的平均值產(chǎn)生的閾值循環(huán)計數(shù)（C t）。基于無模板對照 Ct 值與標準曲線數(shù)據(jù)之間的相關(guān)性，該測定的檢測限為<10拷貝基因組/樣品。
部分產(chǎn)品信息：
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 濃度 | 品牌 |
|---|---|---|---|---|
N2070-10-L | ATP Solution | 50 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2050-10-L | 10 mM dNTP Solution Mix | 100 µmol | 10 mM | Enzymatics |
N2010L | 100 mM 75µmol dNTP Solution Set | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2010-A-L | 100 mM dATP Solution | 75 µmol | 100 mM | Enzymatics |
N2050L | 100µmol dNTP Solution Mix | 100 µmol | 25 mM | Enzymatics |
Y9180L | 10x Uracil Cleavage System | 750 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7670 | 2x HiFi PCR Master Mix | 1 rxn | 2x | Enzymatics |
Y9420L | 5x ER/A-Tailing Enzyme Mix | 24 reactions | N/A | Enzymatics |
Y9380L | E. coli Pyrophosphatase | 50 U | 100 U/mL | Enzymatics |
Y9030L | E. coli Single-Stranded DNA Binding Protein | 1.5 mg | 2.75 mg/ml | Enzymatics |
Y9140-HC-L | End-Repair Mix (High Concentration) | 75 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9140-LC-L | End-Repair Mix (Low Concentration) | 200 Reactions | 1 Rxn/µL | Enzymatics |
Y9080L | Endonuclease VIII | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7600L | EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-) | 10,000 U | 200,000 U/mL | Enzymatics |
X8010L | Exonuclease I | 30,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
X8020L | Exonuclease III | 50,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-HC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (High Concentration) | 10,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
P7010-LC-L | Klenow (3′→ 5′ exo-) (Low Concentration) | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7060L | Klenow Fragment | 2,500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
X8030L | Lambda Exonuclease | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7040L | M-MuLV Reverse Transcriptase | 100,000 U | 200,000 U/ml | Enzymatics |
P7090L | Mako DNA Polymerase (3′→ 5′ exo-) | 3,000 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-HC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (High Concentration) | 100,000 U | 400,000 U/ml | Enzymatics |
P7140-LC-L | Manta 1.0 DNA Polymerase (Low Concentration) | 100,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7610L | NGS Library Prep: 2X VeraSeq™ PCR Mix – 250 Reactions | 250 Reactions | 2X | Enzymatics |
P7590L | Phoenix™ Hot Start Taq DNA Polymerase | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7460L | Poly(A) Polymerase | 1,000 U | 5,000 U/mL | Enzymatics |
Y9260L | RecA | 1.5 mg | 2.0 mg/mL | Enzymatics |
Y9220L | RNAse H | 5,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
Y9240L | RNAse Inhibitor | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
L6010L | T3 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-LC-L | T4 DNA Ligase | 150,000 U | 120,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-HC-L | T4 DNA Ligase (Rapid) | 240,000 U | 600,000 U/ml | Enzymatics |
P7080L | T4 DNA Polymerase | 2,000 U | 3,000 U/ml | Enzymatics |
Y9130L | T4 Gene 32 Protein | 1.0 mg | 10 mg/mL | Enzymatics |
Y9040L | T4 Polynucleotide Kinase | 10,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
L6050L | T4 RNA Ligase 1 | 10,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
L6080L | T4 RNA Ligase 2 | 4,500 U | 30,000 U/ml | Enzymatics |
L6070L | T4 RNA Ligase 2 Truncated | 500 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
L6020L | T7 DNA Ligase | 900,000 U | 3,000,000 U/ml | Enzymatics |
P7260L | T7 DNA Polymerase | 3,500 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
P7180L | T7 RNA Polymerase | 50,000 U | 50,000 U/ml | Enzymatics |
L6060L | Taq DNA Ligase | 20,000 U | 40,000 U/ml | Enzymatics |
P7110L | Taq DSC 2.0 DNA Polymerase | 1,250 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7250L | Taq-B DNA Polymerase | 10,000 U | 5,000 U/ml | Enzymatics |
P7620L | TaqIT | 5,000 U | 50,000 U/mL | Enzymatics |
P7070L | Terminal deoxynucleotidyl Transferase (TdT) | 6,000 U | 20,000 U/ml | Enzymatics |
G5020L | Thermolabile UDG | 500 U | 1,000 U/ml | Enzymatics |
Y9370L | Thermostable Pyrophosphatase | 1,250 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
G5010L | Uracil DNA Glycosylase | 10,000 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7511L | VeraSeq™ 2.0 High-Fidelity DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
P7520L | VeraSeq™ ULtra DNA Polymerase | 500 U | 2,000 U/ml | Enzymatics |
L6030-W-L | WGS Ligase | 24 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7640L | ZipScript™ One-Step RT-qPCR Kit | 1000 Reactions | N/A | Enzymatics |
P7020-HC-L | φ29 DNA Polymerase (High Concentration) | 2,000 U | 100,000 U/ml | Enzymatics |
P7020-LC-L | φ29 DNA Polymerase (Low Concentration) | 2,000 U | 10,000 U/ml | Enzymatics |
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